一、一代测序：Sanger双脱氧链终止法

Sanger测序的核心是利用ddNTP终止DNA链延伸：
1. 反应体系：模板DNA、引物、DNA聚合酶、四种dNTP（其中一种带有放射性或荧光标记）和少量ddNTP
2. 链延伸与终止：DNA聚合酶沿模板合成新链，遇到dNTP时正常延伸，遇到ddNTP时因缺少3'-OH而终止
3. 四个独立反应：分别加入ddATP、ddCTP、ddGTP、ddTTP，产生四组不同长度的片段
4. 电泳分离：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）或毛细管电泳按大小分离片段
5. 读取序列：从短到长读取末端碱基，获得互补链序列
自动化Sanger测序使用四种不同荧光标记的ddNTP，四个反应在同一管中进行，通过激光检测荧光颜色确定碱基类型。
局限性：通量低（每次反应只能读取一条序列），成本高，不适合大规模基因组项目。