二、10x Genomics Chromium工作流程

（1）单细胞悬液制备
- 组织解离为单细胞（机械+酶解法）
- 细胞质控：活性>90%，结团率<5%
- 细胞浓度调整至约1000 cells/μL
（2）GEM生成（Gel Bead-in-Emulsion）
使用微流控芯片同时导入三个流：
1. 单细胞悬液
2. Gel Bead（带有条形码寡核苷酸的凝胶珠）
3. 油相
在微流控通道中形成油包水液滴（GEM）：
- 每个液滴约含1个细胞 + 1个Gel Bead（泊松分布，实际捕获率约50-60%）
- Gel Bead上的寡核苷酸结构：
5'- [PCR引物] - [16bp细胞条形码] - [12bp UMI] - [30bp oligo(dT)] - 3'
（3）细胞内逆转录
- 液滴内，细胞裂解释放mRNA
- mRNA与Gel Bead上的oligo(dT)杂交
- 逆转录酶合成cDNA第一链，同时掺入细胞条形码和UMI
（4）破乳和cDNA扩增
- 破乳回收cDNA
- PCR扩增cDNA
（5）文库构建和测序
- 片段化、加接头、PCR扩增
- Illumina测序（通常2×150 bp）
（6）数据分析
- 根据reads中的细胞条形码将reads分配到不同细胞
- 根据UMI去重（同一个mRNA分子的多个PCR拷贝只计数一次）
- 生成基因×细胞的表达矩阵